PRODUCT CLASSIFICATION
產(chǎn)品分類 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
主編部門:中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部 批準(zhǔn)部門:中華人民共和國(guó)國(guó)家經(jīng)濟(jì)委員會(huì) 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部 試行日期:1983年6月1日 關(guān)于頒發(fā)《醫(yī)院污水排放標(biāo)準(zhǔn)》的通知經(jīng)基〔1983〕37號(hào)根據(jù)原國(guó)家建委(78)建發(fā)設(shè)字第562號(hào)和衛(wèi)生部(77)衛(wèi)科字第240號(hào)通知的要求,由衛(wèi)生部會(huì)同有關(guān)單位共同編制的《醫(yī)院污水排放標(biāo)準(zhǔn)》,已經(jīng)有關(guān)部門會(huì)審?,F(xiàn)批準(zhǔn)《醫(yī)院污水排放標(biāo)準(zhǔn)》GBJ48—83為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),自 一九八三年六月一日起試行。 本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部負(fù)責(zé)管理,其具體解釋等工作由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生研究所負(fù)責(zé)。 國(guó)家經(jīng)濟(jì)委員會(huì) 衛(wèi)生部 一九八三年一月十二日 編制說(shuō)明 本標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)原國(guó)家建委(78)建發(fā)設(shè)字562號(hào)和衛(wèi)生部(77)衛(wèi)科字第240號(hào)文下達(dá)的制訂的任務(wù),由我部委托中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生研究所主持,會(huì)同有關(guān)省、市衛(wèi)生防疫站、醫(yī)學(xué)院校、科研與建筑設(shè)計(jì)等有關(guān)單位編制而成。 遵循我國(guó)“預(yù)防為主”的衛(wèi)生工作方針和《中華人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)法(試行)》,為防止醫(yī)院排放帶有病原體的污水污染環(huán)境,危害人體健康,特制訂本標(biāo)準(zhǔn)。 在編制過(guò)程中,曾對(duì)部分省、市、自治區(qū)醫(yī)院污水的情況進(jìn)行重點(diǎn)調(diào)查,各課題組參照有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)、文獻(xiàn),還進(jìn)行了必要的科學(xué)試驗(yàn),并向有關(guān)單位廣泛征求意見,經(jīng)多次討論修改,由衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)委員會(huì)環(huán)境衛(wèi)生分委員會(huì)會(huì)同有關(guān)部門審核定稿。 本標(biāo)準(zhǔn)分總則、排放標(biāo)準(zhǔn)、設(shè)計(jì)要求與管理要求等四章和附錄一,檢驗(yàn)方法。 在試行本標(biāo)準(zhǔn)的過(guò)程中,請(qǐng)各單位注意積累資料,總結(jié)經(jīng)驗(yàn),如發(fā)現(xiàn)有需要修改和補(bǔ)充之處,請(qǐng)將意見和有關(guān)資料寄送中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生研究所,并抄送我部,以便修訂時(shí)參考。 衛(wèi)生部 一九八三年一月 *章 總則 第1.0.1條 為貫徹“預(yù)防為主”的衛(wèi)生工作方針和《中華人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)法(試行)》。防止醫(yī)院排放帶有病原體的污水污染環(huán)境,危害人體健康,特制訂本標(biāo)準(zhǔn)。 第1.0.2條 本標(biāo)準(zhǔn)適用于縣及縣以上綜合醫(yī)院,以及腸道傳染病和結(jié)核病的??漆t(yī)院、療養(yǎng)院、其它有關(guān)的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)(以下簡(jiǎn)稱醫(yī)院)。 第1.0.3條 新建、擴(kuò)建、改建的醫(yī)院,必須按照本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定,將污水的處理設(shè)施,與主體工程同時(shí)設(shè)計(jì)、同時(shí)施工、同時(shí)使用。 現(xiàn)有醫(yī)院應(yīng)積極采取行之有效的措施,限期達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)的要求。 第二章 排放標(biāo)準(zhǔn) 第2.0.1條 醫(yī)院污水經(jīng)處理與消毒后,應(yīng)達(dá)到下列標(biāo)準(zhǔn): 一、連續(xù)三次各取樣500毫升進(jìn)行檢驗(yàn),不得檢出腸道致病菌和結(jié)核桿菌。 二、總大腸菌群數(shù)每升不得大于500個(gè)。 第2.0.2條 當(dāng)采用氯化法消毒時(shí),接觸時(shí)間和接觸池出水中的余氯含量,應(yīng)符合表2.0.2的要求: 接觸時(shí)間與總余氯量 表2.0.2
第2.0.3條 污水處理構(gòu)筑物中的污泥,必須經(jīng)過(guò)無(wú)害化處理,污泥排放時(shí)應(yīng)達(dá)到下列標(biāo)準(zhǔn): 一、蛔蟲卵死亡率大于95%; 二、糞大腸菌值不小于10-2; 三、每10克污泥(原檢樣中),不得檢出腸道致病菌和結(jié)核桿菌。 第2.0.4條 當(dāng)污泥采用高溫堆肥法進(jìn)行無(wú)害化處理時(shí),堆肥的溫度必須大于50℃,并應(yīng)持續(xù)5天以上。 第2.0.5條 無(wú)上、下水道設(shè)備或集中式污水處理構(gòu)筑物的醫(yī)院,對(duì)有傳染性的糞便,必須進(jìn)行單獨(dú)消毒或其它無(wú)害化處理。 第2.0.6條 醫(yī)院污水經(jīng)處理和消毒后,其所含的污染物質(zhì)與有害物質(zhì)的含量應(yīng)符合現(xiàn)行的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。 第三章 設(shè)計(jì)要求 第3.0.1條 醫(yī)院應(yīng)設(shè)置集中式污水處理構(gòu)筑物。嚴(yán)禁采用滲井、滲坑排放污水。 第3.0.2條 醫(yī)院職工生活區(qū)和行政區(qū)的污水,應(yīng)與病區(qū)的污水分流。 第3.0.3條 醫(yī)院污水處理構(gòu)筑物的位置,宜設(shè)在醫(yī)院建筑物當(dāng)?shù)叵募拘☆l率風(fēng)向的上風(fēng)側(cè),與周圍建筑物之間宜設(shè)綠化防護(hù)地帶。 第3.0.4條 處理構(gòu)筑物的設(shè)計(jì),應(yīng)滿足下列要求: 一、采取防腐蝕、防滲漏措施; 二、確保處理效果,安全耐用; 三、操作方便,便于消毒和清掏,有利于操作人員的勞動(dòng)保護(hù)。 第3.0.5條 氯化法消毒系統(tǒng)的設(shè)計(jì),應(yīng)滿足下列要求: 一、備有發(fā)生故障時(shí)的應(yīng)急設(shè)施; 二、使用液態(tài)氯時(shí),應(yīng)有安全設(shè)施,嚴(yán)禁直接以鋼瓶向污水中投加氯氣。 第四章 管理要求 第4.0.1條 醫(yī)院必須對(duì)污水、污泥嚴(yán)加管理。未經(jīng)消毒或無(wú)害化處理,不準(zhǔn)任意排放、清掏,用作農(nóng)肥。 第4.0.2條 醫(yī)院污水處理設(shè)施應(yīng)定期維修,保證正常運(yùn)轉(zhuǎn),當(dāng)處理設(shè)備發(fā)生故障時(shí),必須采取適當(dāng)措施,確保污水仍能按標(biāo)準(zhǔn)要求排放。 第4.0.3條 醫(yī)院污水處理設(shè)施,應(yīng)配備管理人員和檢驗(yàn)人員。 第4.0.4條 醫(yī)院污水的監(jiān)測(cè),應(yīng)符合下列要求: 一、余氯:連續(xù)式消毒,每日至少監(jiān)測(cè)二次,間歇式消毒,每次排放之前監(jiān)測(cè); 二、總大腸菌群數(shù):每?jī)芍苤辽俦O(jiān)測(cè)一次; 三、傳染病和結(jié)核病醫(yī)院,應(yīng)根據(jù)需要增測(cè)致病菌。 第4.0.5條 各級(jí)衛(wèi)生防疫部門,應(yīng)對(duì)轄區(qū)內(nèi)醫(yī)院的污水、污泥處理情況,進(jìn)行經(jīng)常性衛(wèi)生監(jiān)督,每年抽查不得少于二次。 第4.0.6條 污水、污泥的檢驗(yàn)方法,應(yīng)符合附錄一的規(guī)定。 附錄一 醫(yī)院污水、污泥檢驗(yàn)方法 一污水總余氯的測(cè)定方法 一、原理:采用碘滴定法。用碘標(biāo)準(zhǔn)溶液反滴定(與余氯反 應(yīng)后)過(guò)量的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。 二、試劑: 1、0.00564N硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。 (1)先配制約0.1N硫代硫酸鈉溶液——稱取約25克分析純 硫代硫酸鈉(Na2S203·5H2O)溶于煮沸放冷的蒸餾水中,稀釋至1000毫升,加入0.4克氫氧化鈉或0.2克無(wú)水碳酸鈉,儲(chǔ)存于棕色瓶?jī)?nèi),可保存數(shù)月。 ?。?)標(biāo)定:稱取0.1500克干燥的分析純碘酸鉀(KI03)放于250毫升錐形瓶?jī)?nèi),加入100毫升蒸餾水,加熱溶解后,加入3克碘化鉀和10毫升冰醋酸,靜置5分鐘,自滴定管加約0.1N硫代硫酸鈉溶液,不斷振蕩錐形瓶,直至顏色變?yōu)榈S色;加入1毫升淀粉溶液,繼續(xù)用硫代硫酸鈉溶液滴至剛變?yōu)闊o(wú)色為止,記錄總用量(如滴定完畢,放置若干時(shí)間后,錐形瓶?jī)?nèi)溶液因接觸空氣氧化又顯藍(lán)色??刹槐卦俚味ǎ?。 ?。?)計(jì)算: 硫代硫酸鈉溶液的當(dāng)量濃度 式中W——碘酸鉀重量(克); V——硫代硫酸鈉溶液的用量(毫升)。 (4)配制0.00564N硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液:用除去二氧化碳的蒸餾水,將上面標(biāo)定后的0.1N硫代硫酸鈉溶液稀釋。 2、5%碘化鉀溶液溶解50克分析純碘化鉀于少量新煮沸放冷的蒸餾水中,再稀釋至1000毫升,盛于棕色帶玻璃塞瓶中,好冷藏。如發(fā)現(xiàn)溶液顏色變黃,應(yīng)予重配。 3、醋酸鹽緩沖液pH=4稱取146克無(wú)水醋酸鈉或243克三水醋酸鈉于蒸餾水中,加480克冰醋酸,用蒸餾水稀釋至1000毫升。4、0.1N碘溶液溶解40克分析純碘化鉀于25毫升蒸餾水中,加入13克分析純碘片,不斷攪拌到溶解為止。移入1000毫升容量瓶中,加水至刻度,混勻,待標(biāo)定。 5、0.1000N亞砷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液稱取預(yù)先在干燥器內(nèi)經(jīng)濃硫酸干燥的分析純?nèi)趸椋ˋa203)2.4728克于300毫升燒杯中,加入20毫升1N氫氧化鈉溶液,攪拌使溶解(注意Aa203劇毒?。?。加1N鹽酸或硫酸中和過(guò)量的氫氧化鈉,直至溶液接近中性為止(采用pH試紙)。 將配好的亞砷酸鈉溶液轉(zhuǎn)入500毫升容量瓶中,加水稀釋至刻度,混勻。 6、0.1N碘溶液的標(biāo)定 準(zhǔn)確量取40~50毫升0.1000N亞砷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于250毫升錐形瓶?jī)?nèi)。用待標(biāo)定的0.1N碘溶液滴定,以淀粉作指示劑,滴至剛顯淡藍(lán)色為終點(diǎn)。如能在接近終點(diǎn)時(shí)向溶液中通入二氧化碳使之飽和,可得到很準(zhǔn)確的滴定終點(diǎn)。 7、0.0282N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液 將25克分析純碘化鉀放入1000毫升容量瓶中,加入少量蒸餾水使之溶解。準(zhǔn)確加入標(biāo)定后的0.1N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液,用蒸餾水稀釋至刻度。所需加入標(biāo)定后的0.1N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,按下式計(jì)算: 式中V——標(biāo)定后的0.1N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù); N——標(biāo)定后的0.1N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度; V′——配制0.0282N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積為1000毫升; N′——配制的碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度為0.0282N。 為了測(cè)定更準(zhǔn)確,好每天用0.1000N亞砷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述操作標(biāo)定一次(預(yù)計(jì)用去5~10毫升0.1000N亞砷酸鈉溶液即可)。 此溶液應(yīng)盛于棕色玻璃磨口瓶中,存放時(shí)避免陽(yáng)光直射,不可接觸橡膠制品。 8、1%淀粉溶液稱取0.5克可溶性淀粉于200毫升燒杯內(nèi),加少量蒸餾水調(diào)成糊狀,加入剛煮沸的蒸餾水100毫升。冷卻后,加入0.13克水楊酸作保存劑。 三、步驟: 1 污水水樣中余氯小于10毫克燉升時(shí),取200毫升污水樣;余氯多時(shí),應(yīng)按比例減少水樣體積。 2 將200毫升污水樣加入500毫升錐形瓶中。加入500毫升0.00564N硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,1毫升5%碘化鉀溶液和1毫升醋酸鹽緩沖液,使pH保持在3.5~4.2之間。用0.0282N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,接近終點(diǎn)前,加入1毫升淀粉溶液,滴至剛顯淡藍(lán)色為終點(diǎn)(混勻后藍(lán)色不應(yīng)消失)。把后1滴碘液的體積(約為0.05毫升)從讀數(shù)中減去。200毫升污水樣消耗1毫升0.00564N硫代硫酸鈉溶液時(shí),相當(dāng)于存在1毫克/升余氯,故余氯在5毫克/升時(shí),需用5毫升試劑;余氯在10毫克燉升時(shí),應(yīng)加入10毫升試劑。污水中余氯更高時(shí),就按比例增加試劑。碘滴定法測(cè)得的余氯為總余氯,并按下式計(jì)算: 式中CL2——總余氯(毫克/升); A——0.00564N硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù); B——0.0282N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù); C——污水樣毫升數(shù)。 二污水總大腸菌群的檢驗(yàn)方法 一、采樣方法 用采水器或其他滅菌容器采取污水樣1000毫升,放入滅菌瓶?jī)?nèi),如果是經(jīng)加氯處理的污水,需加1.5%硫代硫酸鈉5毫升中和余氯。 二、檢驗(yàn)方法 總大腸菌群系指一群需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌在37℃恒溫箱內(nèi),培養(yǎng)24小時(shí),能使乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣。總大腸菌群數(shù)系指每升污水中,所含的總大腸菌群的數(shù)目。 ?。ㄒ唬┏醢l(fā)酵試驗(yàn):以無(wú)菌操作將各盛有3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液5毫升的5支發(fā)酵管內(nèi),各接種污水樣10毫升,將各盛有單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液約10毫升5支的發(fā)酵管內(nèi),各接種污水樣1毫升,再將各盛有單料乳糖蛋白臟培養(yǎng)液約10毫升的5支發(fā)酵管內(nèi),各接種1∶10稀釋的污水樣1毫升(相當(dāng)于原污水樣0.1毫升)。將此15支管已接種的發(fā)酵管置于37℃恒溫箱內(nèi),培養(yǎng)24小時(shí)。 ?。ǘ┢桨宸蛛x:經(jīng)培養(yǎng)24小時(shí)后,將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管,分別接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基或品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上,置37℃恒溫箱培養(yǎng)18~24小時(shí),挑選符合下列特征的菌落,取菌落的一小部分,進(jìn)行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。 1 伊紅美蘭培養(yǎng)基上的菌落色澤: ?。?)深紫黑色,具有金屬光澤的菌落; ?。?)紫黑色,不帶或略帶金屬光澤的菌落; (3)淡紫紅色、中心色較深的菌落。 2 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上的菌落色澤: ?。?)紫紅色,具有金屬光澤的菌落; (2)深紅色,不帶或略帶金屬光澤的菌落; ?。?)淡紅色,中心色較深的菌落。 (三)復(fù)發(fā)酵試驗(yàn):涂片、鏡檢的菌落,如為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌,則挑取上述典型菌落1~3個(gè)接種于一支單料乳糖發(fā)酵管內(nèi),然后置于37℃恒溫箱內(nèi),培養(yǎng)24小時(shí),產(chǎn)酸產(chǎn)氣者(包括小量產(chǎn)氣)即證實(shí)有大腸菌群存在。 根據(jù)證實(shí)有大腸菌群存在的陽(yáng)性管數(shù),查對(duì)總大腸菌群近似數(shù)(MpN)檢索表(附表1.1)即是每升污水中的大腸菌群數(shù)。此MPN表中所列數(shù)值系指100毫升水樣中的細(xì)菌數(shù),因此需將表中的數(shù)值再乘10、為每1000毫升水中的細(xì)菌數(shù)。舉例:某一污水樣接種10毫升的5支管中有5管為陽(yáng)性;接種1毫升的5支管中有2管為陽(yáng)性;接種1∶10稀釋水樣1毫升(即原污水樣0.1毫升)的5支管皆為陰性,即結(jié)果為5、2、0,查附表1.1得知100毫升污水中總大腸菌群數(shù)為49個(gè),即1000毫升污水中總大腸菌群數(shù)為49×10=490個(gè)。 總大腸菌群近似數(shù)(MPN)檢索表附表1.1 ?。偨臃N量55.5毫升,其中5份10毫升水樣;5份1毫升水樣;5份0.1毫升水樣)
續(xù)表1
續(xù)表2
續(xù)表3
續(xù)表4
三沙門氏菌屬和志賀氏菌屬的檢驗(yàn)方法 甲、污水 一、樣品處理 水樣500毫升,加入滅菌的10%無(wú)水碳酸鈉溶液2毫升,混合后,再加入滅菌的10%硫酸鐵溶液1.75毫升,混合均勻。靜置1小時(shí),傾去上清液(沉淀物約為40毫升左右)。進(jìn)行沙門氏菌屬和志賀氏菌屬培養(yǎng)。 二、增菌培養(yǎng) 1 沙門氏菌屬:吸取樣品處理后的沉淀物20毫升,加于20毫升雙料亞硒酸鹽(SF)增菌液內(nèi),也可加于亞硒酸鹽甘露醇(SFM)或氯化鎂孔雀綠(MM)增菌液內(nèi)。置于37℃或41℃恒溫箱;培養(yǎng)24小時(shí)。 2 志賀氏菌屬:吸取樣品處理后的沉淀物20毫升,加于20毫升雙料革蘭氏陰性(GN)增菌液內(nèi),置于37℃恒溫箱,培養(yǎng)6小時(shí)。 三、平板分離 1 沙門氏菌屬:取上述經(jīng)培養(yǎng)的沙門氏菌用增菌培養(yǎng)液,接種沙門氏菌屬——志賀氏菌屬(SS)平板或??送幸颍℉ekto-en簡(jiǎn)稱HE)平板,置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)。也可接種亞硫酸鉍(BS)平板,置于37℃恒溫箱,培養(yǎng)48小時(shí)。 2 志賀氏菌屬:取上述經(jīng)培養(yǎng)的志賀氏菌用增菌培養(yǎng)液,接種SS平板或HE平板,置于37℃恒溫箱,培養(yǎng)24小時(shí)。 四、挑選菌落 1 沙門氏菌屬:挑取在SS平板上,呈無(wú)色透明或中間有黑心,直徑1~2毫米的菌落;挑取在HE平板上,呈藍(lán)綠色,有或無(wú)黑心,直徑1~2毫米的菌落;挑取在BS平板上,呈黑色,培養(yǎng)基周圍具有金屬光澤的菌落。 2 志賀氏菌屬:挑取在SS平板上,呈無(wú)色透明,直徑1~1.5毫米的菌落,挑取在HE平板上,呈綠色的菌落。 3 每個(gè)平板少挑取5個(gè)以上可疑腸道病原菌菌落,轉(zhuǎn)種三糖鐵或其他鑒別培養(yǎng)基中,置于37℃恒溫箱;培養(yǎng)18~24小時(shí)。 五、生化試驗(yàn)及血清學(xué)檢驗(yàn) 1 沙門氏菌屬:在三糖鐵培養(yǎng)基中,如不發(fā)酵乳糖,葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,一般產(chǎn)生硫化氫。有動(dòng)力者,先與沙門氏菌A~F群O多價(jià)血清作玻璃片凝集,凡與多價(jià)O血清凝集者,再與O因子血清凝集,以確定其所屬群別,然后用H因子血清,確定血清型。雙相菌 應(yīng)證實(shí)兩相的H抗原,有Vi抗原的菌型(傷寒和丙型副傷寒沙門氏菌)應(yīng)用Vi因子血清檢查。 化試驗(yàn):應(yīng)進(jìn)行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素試驗(yàn)。沙門氏菌屬中除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌產(chǎn)氣外,通常發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)氣、均發(fā)酵甘露醇和麥芽糖(但豬傷寒沙門氏菌、雛沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖),不分解乳糖、蔗糖,尿素酶和靛基質(zhì)為陰性,通常產(chǎn)生硫代氫。除雞、雛沙門氏菌和傷寒沙門氏菌的O型菌株無(wú)動(dòng)力外,通常均有動(dòng)力。如遇多價(jià)O血清不凝集而一般生化反應(yīng)符合上述情況時(shí),可加做側(cè)金盞花醇、水楊素和氰化鉀試驗(yàn),沙門氏菌均為陰性。 2 志賀氏菌屬:在三糖鐵培養(yǎng)基上,葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,無(wú)動(dòng)力,不產(chǎn)生硫化氫,上層斜面乳糖不分解。 生化試驗(yàn):應(yīng)進(jìn)行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖,蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素試驗(yàn)。志賀氏菌屬能分解葡萄糖,但不產(chǎn)氣(福氏志賀氏菌6型有時(shí)產(chǎn)生少量氣體),一般不能分解乳糖及蔗糖,宋內(nèi)氏志賀氏菌對(duì)乳糖及蔗糖遲緩發(fā)酵產(chǎn)酸。志賀氏菌屬均不產(chǎn)生硫化氫,不分解尿素,無(wú)動(dòng)力。對(duì)甘露醇、麥芽糖的發(fā)酵及靛基質(zhì)的產(chǎn)生,則因菌株不同而異。 如遇多價(jià)血清玻璃片凝集試驗(yàn)為陰性,而生化反應(yīng)符合上述情況時(shí),可加做肌醇、水楊素、V—P、枸櫞酸鹽、氰化鉀等試驗(yàn)。志賀氏菌屬均為陰性反應(yīng)。 血清學(xué)檢查:志賀氏菌屬分為4個(gè)群,先與多價(jià)血清作玻璃片凝集試驗(yàn),如為陽(yáng)性,再分別與A、B、C、D群血清凝集,并進(jìn)一步與分型血清做玻璃片凝集,后確定其血清型。 乙、污泥 一、樣品處理 用滅菌匙稱取污泥30克,放入滅菌容器內(nèi),加入300毫升滅菌水,充分混勻制成1∶10混懸液。 二、增菌培養(yǎng) 1 沙門氏菌屬:吸取上述1∶10混懸液100毫升,加于100毫升雙料亞硒酸鹽(SF)增菌液內(nèi),也可加于亞硒酸鹽甘露醇(SFM)或氯化鎂孔雀綠(mm)增菌液內(nèi)。置于37℃或41℃恒溫箱,培養(yǎng)24小時(shí)。 2 志賀氏菌屬:吸取上述1∶10混懸液100毫升,加于雙料革蘭氏陰性(GN)100毫升增菌液內(nèi)。置于37℃恒溫箱,培養(yǎng)6小時(shí)。 三、平板分離、挑選菌落、生化試驗(yàn)及血清學(xué)檢查均與污水樣品檢驗(yàn)方法相同。 四污泥糞大腸菌值的檢驗(yàn)方法 一、初發(fā)酵試驗(yàn):按圖1所示將污泥稀釋,分別將污泥樣品接種于裝有10毫升乳糖膽鹽培養(yǎng)液的內(nèi)有倒管的試管中。再將已接種的四支試管置于44℃恒溫箱,培養(yǎng)24小時(shí)。 圖1污泥的稀釋和接種示意圖 二、平板分離:經(jīng)培養(yǎng)24小時(shí)后產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管,分別劃線接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基或品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上。置于37℃恒溫箱培養(yǎng)18~24小時(shí)。挑選符合下列特征菌落的一小部分。進(jìn)行涂片,革蘭氏染色,鏡檢。 1 伊紅美蘭培養(yǎng)基上的菌落色澤; (1)深紫黑色,具有金屬光澤的菌落; (2)紫黑色,不帶或略帶金屬光澤的菌落; ?。?)淡紫紅色,中心色較深的菌落; 2 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上的菌落色澤; ?。?)紫紅色,具有金屬光澤的菌落; (2)深紅色,不帶或略帶金屬光澤菌落; ?。?)淡紅色,中心色較深的菌落。 三、復(fù)發(fā)酵試驗(yàn):上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌,則挑取該菌落的另一部分再接種于內(nèi)有倒管的乳糖發(fā)酵管中每管可接種分離自同一初發(fā)酵管的典型的菌落1~3個(gè)。置于44℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)。有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者即證實(shí)有糞大腸菌群存在。按陽(yáng)性管數(shù)查糞大腸菌值檢索表(附表1.2)即得出每升(1000克)糞大腸菌值。例如接種污泥量1克發(fā)酵管陽(yáng)性(+),0.1毫升發(fā)酵管陰性(-),0.01毫升為陽(yáng)性(+),0.001毫升為陰性(-)查附表1.2,當(dāng)陽(yáng)性,陰性管數(shù)為+-+-時(shí),糞大腸菌值為0.1。 糞大腸菌值檢索表(接種總量1.111克) 附表1.2
五污泥蛔蟲卵的檢驗(yàn)方法 一、污泥樣品的采集: 先把泥堆盡量劃為四等份,而后在每份的中間,用鐵鍬或小鏟各采污泥約500克。同時(shí),在堆泥的中間也采500克,一并放在塑料桶或搪瓷桶中。攪拌均勻,并挑去固體夾雜物,再?gòu)闹腥〕?00克置于塑料袋或其他容器中,帶回實(shí)驗(yàn)室。 二、污泥樣品的處理: 將現(xiàn)場(chǎng)帶回的樣品,倒于燒杯中,如遇樣品稍干且有結(jié)塊時(shí),可將其倒于搪瓷盤中,再行攪拌,同時(shí)用大鑷子,一面攪拌,一面將硬塊夾碎,去掉肉眼能看出的夾雜物,如腐爛的布條、草梗、小石塊等。然后,將樣品裝入廣口瓶中,貼上標(biāo)簽,標(biāo)明樣品號(hào)碼、醫(yī)院名稱、采樣日期和處理前或處理后的情況等。 三、污泥樣品的檢驗(yàn) 上述樣品處理后,應(yīng)立即進(jìn)行檢驗(yàn),不能立即進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí),可適當(dāng)加入約5—10毫升3~5%福爾馬林溶液或3%鹽酸溶液,瓶口上放置一個(gè)適宜大小的表面皿。然后放于冰箱內(nèi),以防微生物的繁殖和抑制蛔蟲卵的發(fā)育。 1 水洗 從已經(jīng)處理過(guò)的500克污泥樣品中,稱取100克置于500毫升錐形量杯中,加水約500毫升。用玻璃棒攪拌后靜置之。讓其自然沉淀,經(jīng)1~2小時(shí)后,倒去污泥上面的水,另?yè)Q清水?dāng)嚢韬螅僮屍渥匀怀恋?,?jīng)半小時(shí)后,再倒去上面的水,另加清水,如此反復(fù)進(jìn)行3~4次,直到污泥上面的水接近無(wú)色為止。 2 過(guò)濾 倒去沉淀上面的清水,用30孔/@金屬篩子過(guò)濾于另一500毫升錐形量杯中,棄去阻留在篩上的泥渣。沉淀20~30分鐘后,倒去沉淀上面的液體、另加清水,如此反復(fù)水洗2~3次,后倒去上清液,將沉淀物倒入10毫升離心管中。經(jīng)2500轉(zhuǎn)/分離心3分鐘后,倒去上清液。 3 離心飄浮 管內(nèi)注入飽和食鹽水,經(jīng)用玻璃棒攪勻后,離心3分鐘,由于蛔蟲卵比飽和鹽水的比重小,所以管中絕大多數(shù)的蛔蟲卵均浮聚在液面。(注意:加入食鹽水量不得少于沉淀物的20倍)。 4 離心沉淀 用毛細(xì)吸管反復(fù)吸取管中斜面上的浮膜于另一離心管中。加入清水,經(jīng)攪勻后,再行離心,蟲卵比水的比重大,因而下沉于管底。然后小心倒去上清液。 5 培養(yǎng) 注入2~3毫升清水于管中,加幾滴5%福爾馬林溶液,置于24~26℃恒溫箱中,培養(yǎng)15~20天。在培養(yǎng)過(guò)程中,清水不得少于0.5~1.0毫升。 6 鏡檢 樣品經(jīng)培養(yǎng)15~20天后取出。用毛細(xì)吸管吸去上面的清水,余下含蟲卵的沉淀物。在一張干凈的載玻片的滴一滴清水。用毛細(xì)吸管吸一小滴沉淀物于水中。涂勻后蓋以蓋玻片,在低倍鏡下檢查,必要時(shí),再換以高倍鏡。記錄500個(gè)以上死、活蟲卵數(shù)。查完一張片子而卵數(shù)不及500個(gè)時(shí),依同法作第二張涂片檢查。涂片不宜太厚。否則視野模糊不清,影響觀察。一般涂片厚度能以透過(guò)涂片尚能辯認(rèn)報(bào)紙上的字跡為宜。而后在適宜的溫度和濕度下。經(jīng)過(guò)15~20天的培育?;罨紫x卵就會(huì)逐漸發(fā)育到幼蟲期。而死卵則在同一條件下仍然保持單細(xì)胞期或停留于某一發(fā)育階段。故易于區(qū)別。 鏡檢時(shí)為達(dá)到較為快速而明顯地辨認(rèn)幼蟲起見,可在載玻片上的滴一滴預(yù)先配好避光保存的30%次氯酸鈉溶液〔商品名為安替福明(antiformin〕以代替清水作成涂片,置于顯微鏡下觀察,可以看見被包在卵的外層的蛋白質(zhì)殼逐漸溶解,使卵內(nèi)的幼蟲一目了然。因此亦稱此液為脫殼液。如遇沉淀物中渣子較多卵數(shù)較少時(shí),可以直接注入幾滴此脫殼液于離心管中,與沉淀物混合并攪勻之,而后吸一滴混合液于載玻片上,蓋以蓋玻片,直接鏡檢即可。此時(shí)視野格外清晰。 在培養(yǎng)第15~20天未查見幼蟲時(shí),應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)到30天(注意:加過(guò)脫殼液的樣品,不能再繼續(xù)培養(yǎng))。 后,就500個(gè)以上的死、活蛔蟲卵數(shù),求出死卵的百分率。 如此檢驗(yàn)的全過(guò)程已告結(jié)束,可從冰箱中取出剩余的樣品,處理之。 |
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